DNA建庫方法大致可分為這幾種類型
更新時間:2022-02-21 點擊次數(shù):3598
DNA分子的功能是貯存決定物種性狀的幾乎所有蛋白質(zhì)和RNA分子的全部遺傳信息,對DNA信息的解讀,對于我們研究生命的奧秘、疾病的機(jī)理等有著重要的意義。DNA類的文庫主要分為:DNA小片段文庫、DNA大片段文庫、Exon文庫、PCR-Free文庫和單細(xì)胞文庫等。DNA建庫方法是分子生物學(xué)的實驗原理,其本質(zhì)就是在待測片段兩端加上接頭的過程。
DNA小片段文庫是指片段大小在1kb以下的普通DNA文庫(200bp、350bp、500bp等),DNA小片段文庫可用來進(jìn)行人重測序,動植物、微生物的de novo和重測序,16s rRNA測序,宏基因組測序等項目類型的文庫構(gòu)建。
DNA大片段文庫,又稱之為末端配對(mate-paired)文庫,片段長度大于1kb,主要用于動植物,微生物的de novo測序。
PCR-Free文庫,顧名思義,就是在文庫構(gòu)建過程中不需要進(jìn)行PCR的文庫。主要是針對一些特殊樣本,比如GC含量高、PCR擴(kuò)增困難的樣本和PCR產(chǎn)物。不足之處在于所需的樣本起始量較少。
Exon文庫:人類外顯子組總共約30 Mb,占人類基因組約1%,外顯子具有高度的保守型,且大部分疾病的致病位點位于外顯子區(qū)。外顯子測序是指利用序列捕獲技術(shù)將外顯子區(qū)域DNA捕捉并富集后進(jìn)行高通量測序的基因組分析方法。Exon文庫主要用于人全外顯子測序和目標(biāo)區(qū)域測序。
單細(xì)胞DNA文庫:隨著二代測序技術(shù)的發(fā)展,把一次實驗測許多條DNA序列的這個難題解決之后,一次把一個人的全基因組給測出來,最極限的情況,就是樣本量少到一個細(xì)胞,就可以測出整個基因組的序列信息。
目前DNA建庫方法按照接頭連接方式不同可分為五類:
1、PCR擴(kuò)增子建庫;
2、Swift法建庫;
3、轉(zhuǎn)座酶法建庫;
4、TA克隆連接接頭建庫;
5、平末端連接接頭建庫。